homyrouz.ru — Банкетный зал Хоми Роуз

Times, Sunday Times (2016)

Times, Sunday Times (2016)

Солнце (2016)

Солнце (2017)

Times, Sunday Times (2016)

Smithsonian Mag (2017)

Times, Sunday Times (2017)

Times, Sunday Times (2016)

Times, Sunday Times (2014)

Times, Sunday Times (2008)

Подробнее …

The Sun (2012)

Times, Sunday Times (2010)

Times, Sunday Times (2010)

Times, Sunday Times (2013)

Times, Sunday Times (2010)

Times, Sunday Times (2006)

Times, Sunday Times (2010)

Times, Sunday Times (2010)

Times, Sunday Times (2008)

Times, Sunday Times (2007)

Times, Sunday Times (2009)

Times, Sunday Times (2014)

Times, Sunday Times (2012)

Times, Sunday Times (2008)

Times, Sunday Times (2008)

Times, Sunday Times (2013)

Times, Sunday Times (2014)

Times, Sunday Times (2015)

Times, Sunday Times (2016)

Министерство внутренних дел США

Министерство внутренних дел США

RT @SecDebHaaland: Каждый день #EarthDay в @Interior! Наша планета зависит от нас. Наша задача — защитить его и создать лучший Mot… https://t. co/bmAmTifo5V

Министерство внутренних дел США

Каждому национальному парку есть что рассказать. На #NationalParkWeek мы хотим услышать ваши любимые воспоминания! https://t.co/lMy5g8vI5B

Министерство внутренних дел США

. @ BSEEgov ценит морскую жизнь, обитающую в наших водах. В рамках программы «Морская экология» BSEE тесно сотрудничает с @BOEM_DOI, чтобы смягчить последствия, которые морская энергетическая деятельность может иметь для обитателей океана.Чтобы узнать больше ➡️ https://t. co/sRRLk3BbUs https://t.co/dZljE4zX4j

Министерство внутренних дел США

Весна в воздухе! Яйца появляются в гнездах на @USFWSRefuges и других общественных местах от побережья до побережья. Узнайте о яицах и угрозах, с которыми они сталкиваются: https://t. co/9UO9j07g3i https://t.co/J1yCFLFJYo

Министерство внутренних дел США

«Природа не обращает внимания на ваш пол, вашу расу, ваши способности или ваши недостатки. Единственное, что имеет значение, — это то, что вы покидаете пространство таким, каким вы его нашли». — Тереза ​​Бейкер #NationalParkWeek Фотография @GlacierNPS, сделанная Отем Шрок (https://t.co/7u0uZGdl5a) https://t.co/4xkGQ2Y9SP

Министерство внутренних дел США

Поднимитесь к новым высотам с забавными фактами в Международный день признания летучих мышей: 🦇 47 видов летучих мышей в Северной Америке 🦇 1400 видов летучих мышей по всему миру 🦇 1 из 5 видов млекопитающих — летучие мыши 🦇 Летучие мыши — единственные настоящие летающие млекопитающие Подробнее: https: // t. co / 6ve4MAb5Vo https://t.co/Q7ab3bRtpU

Министерство внутренних дел США

RT @SecDebHaaland: После еще одной недели, наполненной невыразимым насилием, я размышляю о том, как это повлияло на всех нас, например… https://t. co/MdXdeMNsNR

Министерство внутренних дел США

Присоединяйтесь к нам, чтобы отпраздновать #NationalParkWeek с 17 по 25 апреля! Мы поговорим в 13:00 по восточноевропейскому времени, чтобы начать! В течение всей недели в парках по всей стране будут проходить различные специальные программы, мероприятия и цифровые впечатления. https://t.co/GcvOBped9w

Интерьер как интерьер | Гуманитарные и социальные науки Коммуникации

Коллекция тематических статей, которую сопровождает эта статья. ^{Сноска 1} рассматривает эту сложную взаимосвязь между дизайном интерьера и интерьером, между архитектурными структурами и субъективностью, которую они порождают или бросают вызов.Дом (интерьер) как дом (интерьер) особенно показателен, потому что современный рационалистический дизайн возникает в дебатах о дизайне интерьера. Уже в середине XIX века Якоб фон Фальке (первый хранитель Венского музея прикладного искусства) называл интерьер эпохи Возрождения рациональным и приспособленным к современной жизни (Von Falke, 1866). Интерьер эпохи Возрождения также был образцом для Георга Хирта, поскольку он гармонично сочетает структуру и орнамент (Hirth, 1886). Рациональная приспособляемость, которой требует современная жизнь, была связана с дизайном интерьера.Корнелиус Гурлитт, помимо известной переоценки архитектуры барокко, также описал правила, которым должен был следовать буржуазный дом (Gurlitt, 1888). Современная жизнь, начиная с середины XIX века, сосредоточена вокруг интерьера, который соответствует его основным ценностям, а именно: рациональному пространственному разделению, использованию качественных материалов и линейным формам, подчеркивающим функциональность. Тем не менее, Гурлитт интегрирует дизайн интерьера в более широкое размышление о вкусе: хотя большая часть его Im Bürgerhause состоит из собрания мыслей о каждом сегменте современного дома, он связывает вопросы стиля с литературой и живописью.Прежде чем спросить, что такое стильный интерьер, Гурлитт задается вопросом, является ли стиль стихотворения чем-то вечным и человечным или чем-то эфемерным, «измеренным для нас и нашего времени» ( das uns und unserer Zeit Gemässe , Gurlitt, 1888, стр. 33) .

Размышлять о интерьере означает обсудить наш интерьер, более точно прояснить наше понимание прошлого, его эстетические ценности и наше особое понимание стиля, включая роль, которую играет мода. Размышление о дизайне интерьера — это не просто вопрос расстановки и проектирования мебели, выбора подходящих цветов или адаптации прошлого здания к новым требованиям; это вопрос построения сценографии для нашей субъективной жизни, наших ценностей, эмоций и мыслей.Модернистская адаптация форм к функциям означает как раз то, что интерьер современного предмета превратился в приспособляемую машину. Многие современные дизайны интерьеров, особенно в контексте розничной торговли, нацелены на механизацию человеческого внутреннего пространства, его адаптацию к плоскому процессу потребления, приспосабливая его только к одной функции: потреблению.

Однако взаимосвязь между дизайном интерьера и интерьером имманентна по причинам репрезентативности. Теоретики, подобные Гастону Башлару, и писатели, такие как Жорж Перек, прекрасно понимали, что интерьер всегда был фигурой сознания во всех его измерениях.Внутренность — это пространство, в котором разворачиваются все траектории сознания как интенционального опыта, от осознания до воспоминаний и воображения. В этом смысле интерьер — это конституирующая фигура сознания, как показал Жан-Луи Кретьен, от Августина до Монтеня и далее (Chrétien, 2014). В средневековье закрытие двери комнаты и падение на себя было возможностью встретиться с Богом в cubiculum cordis , так называемой закрытой «комнате сердца» (Chrétien, 2014, стр. 47).Можно было побыть наедине с собой, но это обстоятельство облегчало молитвы, размышления, медитации и т. Д. Интерьер представлял собой закрытую комнату, но внутреннее пространство ( cubiculum cordis ) было направлено куда-то в другое место. У Монтеня ( On Solitude ) «одиночество» отражает современное состояние рефлексии автономно, наедине с собой. Хотя Августин написал свои Soliloquies , чтобы познать себя, это самопознание постоянно предполагает присутствие Всевышнего.В современных условиях интерьер комнаты представляет собой безопасное пространство для монолога, не имеющего необходимого отношения к какому-либо Богу (Chrétien, 2014, стр. 93). Тем не менее внутреннее пространство во всех его формах — от кельи монаха (Гийом де Сен-Тьерри) до возделывания сада (Вольтер) — формирует как светское, так и религиозное сознание.

Здесь важно то, что это представление внутреннего пространства влияет на то, как мы представляем себе мир. Именно в этом смысле дизайн интерьера важен: интерьер — это фигура нашей субъективности, но это важно только потому, что он сигнализирует о том, как мы думаем о мире вне себя: сад Вольтера предлагает рефлексивную позицию, которая ограничивает сложный мир ограниченным. , местные и прямые виды деятельности; Закрытая комната Монтеня предполагает, что мышление в мире требует этого временного уединения.Досовременное понимание интерьера как открытости к божественности становится в современности позицией мышления по отношению к миру. Мы могли бы процитировать обычные примеры и перейти от книги Ксавье де Местра «Путешествие вокруг моей комнаты » (1794), которая представляет собой целый мир от границ спальни до интерьера Жоржа Перека в виде разделения объектов, движений и операций. Значение Перека становится очевидным, когда мы читаем Species of Space (2008) вместе с Попытка вычистить место в Париже (2010) и Penser / Classer (2003).Это параллельное прочтение доказывает, что внутренность, внутренняя жизнь ума, становится способом восприятия «общественного внутреннего» (если использовать понятие Пимлотта) в виде последовательностей, классификации и процессов. У Perec интерьер представляет собой модель для представления внешнего мира. В произведении Томаса Бернхарда « Старые мастера » (2010) музейная комната с картиной Тинторетто и диваном облегчает полную повествовательную импровизацию и социальные комментарии. Интерьер музея — это возможность критиковать современное общество, его ценности и культурный выбор.Интерьер открывает внутренность главного героя, пространство с собственной глубиной, воображением, направлениями и границами.

Интерьер как архитектурный принцип

Изначальные архитектурные инструменты для построения «внутреннего» и определения его отношения к «внешнему» тройственны. Во-первых, и этаж : пляжное полотенце, ткань для пикника, подиум, стол, стул и кровать, которые гарантируют, что человеку не нужно есть, сидеть, спать и совокупляться на голой земле. Люди, которым приходится есть и спать на голой земле, которые не могут позволить себе чистый песок, чтобы покрыть землю своих домов, живут в конюшнях, как животные, и их следует пожалеть.Архитектура начинается с покрытия земли, с отделения жилища человека от земли, темной, глубокой земли и всего, что там скрывается. 10 Таким образом, бездна под ней, Подземный мир, удерживается на расстоянии искусственным покрытием: ковром , цветной песочный ковер, декоративный кафельный пол. Ткачество, безусловно, является одним из древнейших символов космогонии, тканый ковер — одним из самых архаичных символов упорядоченного Космоса. Знаки и символы, которые покрывают полы — например, в гобеленах берберской культуры богиня-мать во всех ее фигуральных и геометрических образах и мотивах — сохранились в декоративных узорах, используемых на древних мозаичных полах и, по сей день, в керамических полах, и дизайн промышленных восточных ковров. ^{Footnote 6} Земля дома человека покрыта и очищена знаками, которые одновременно являются символическими и магическими; они изгоняют темные силы, которые скрываются под ними, и организуют сцену человеческой жизни. Пол сам по себе уже создает комнату — см. «Комнату для Монникенхайде» бельгийского художника Рихарда Венле, установленную в Зоерселе (рис. 1). О Дедале — мифическом первом инженере-архитекторе — мы знаем очень мало, но одно из изобретений, сделавших его знаменитым, — это танцпол на Крите: священное пространство, где происходит человеческое существование, символически представленное ритуальным танцем.

Ричард Венлет, Open Room Integration , Huize Monnikenheide, Zoersel 2006. Воспроизведено с разрешения художника. На это число не распространяется международная лицензия Creative Commons Attribution 4.0. Авторское право: автор.

Второе средство для создания искусственного интерьера — стена. Бордюр, ров, колючая проволока, живая изгородь, бегущий забор, порог, стеклянные ширмы. В принципе, меловой линии достаточно, чтобы создать «внутреннюю» и / или «внешнюю» — хотя не всегда может быть очевидно, какая сторона «внутренняя», а какая «внешняя»: часто требуется «внутренняя информация» о социальный или политический конфликт, чтобы увидеть, как была проведена граница, или чтобы узнать, предназначена ли стена для исключения или заключения за решетку.Но стена в любом случае работает совсем иначе, чем пол или потолок, которые говорят о месте Человека в Космосе. Стены используются для разделения царств дня и ночи, мужчин и женщин, мужчин и животных, живых и мертвых, коммунизма и капитализма, Мексики и Соединенных Штатов. Более того, архаическое пространство организовано вокруг «центров», священных мест, которые так или иначе связаны с силами, которые пребывают «высоко вверху» и / или «глубоко внизу». Стена также является средством ограничить и изолировать священное в «центре» и отдать остальной мир светской жизни обычных людей.Ворота и стена кладбища в данном случае весьма значительны и иллюстрируют эту ситуацию. Но стены в первую очередь организуют по горизонтали и разделяют мир человека в социальном и культурном отношении; они подтверждают различия в богатстве и власти, создают дистанцию ​​между телами, отводят место семьям племени, мужчинам и женщинам, взрослым и детям. И они различают еду и сон, грязь и чистоту, общественное и личное. Кроме того, вид и материальность стены определяют степень близости, условия того, что можно увидеть или услышать публично, и то, как личная жизнь может быть скрыта от глаз и мнений других.

Третьим архитектурным средством создания «интерьера» является крыша. Крыша отделяет Мир Внизу от Неба Вверху. Достаточно одной крыши для создания «интерьера»: зонта или шляпы, навеса, шатра, даже кроны дерева … Если смотреть снаружи, крыша закрывает «изнутри»; если смотреть изнутри, то потолок спасает интерьер от воздействия Небес. Сон на открытом воздухе под звездами — это, безусловно, незабываемый поэтический опыт и приключение, но человечеству в первую очередь нужна крыша над головой.Именно потолок определяет форму и масштаб «мира внизу», в котором живет человек. Очень хорошо чувствуется разница между низким плоским потолком гостиной и монументальным куполом церкви, выкрашенной в синий цвет с золотыми звездами, символизирующими небосвод. Потолок, к которому можно почти прикоснуться, сильно отличается от потолка с большим количеством пустого пространства над головами. Смотреть на потолок означает созерцать Небеса, точно так же, как смотреть в окно означает видеть (или не видеть) «далекое» или горизонт.Поэтому потолки отгораживались от стен лепными украшениями и покрывались, как и полы, знаками и раскрашенными фигурами, сценами, а иногда и самим небом. Среднестатистическая коммерческая модернистская архитектура легко забывает о потолке или рассматривает его как обратную сторону этажа выше, как не что иное, как белую плоскую поверхность. Но потолок — это последнее, на что смотрят конец дня и конец жизни! Это то, что человек видит в кресле стоматолога перед тем, как заснуть или умереть в больнице.Уйти из жизни под куполом или под сводом …

Самый простой способ построить полностью определенный, закрытый и в то же время символически «открытый» интерьер, связанный с миром, чтобы живущие в нем могли Поймите, где он, это дом, состоящий из комнат: пол, четыре стены и крыша, с входом и окнами, выходящими наружу. Пол + стены + крыша = ящик, домик, как его рисуют дети. Земля + четыре направления + небо = Мир. Конечно, можно построить даже меньше , более минималистично.В народной и досовременной архитектуре используются еще более важные пирамидальные или конические объемы, состоящие только из крыши и пола без стен. Круглые дома, только купол, живущие внутри сферы. Все эти примитивные формы и постройки очень сильны в архитектурном отношении. Экспрессионистская архитектура Бруно Таута, Германа Финстерлина, Бесконечный дом Фредерика Кислера, органическая архитектура пятидесятых годов и Заха Хадид — все они избегают коробок и углов, изобретая непрерывные пространства.

Их архитектура может формально и технически быть очень оригинальной и новаторской, но в то же время заново изобретает своего рода «сильную», священную архитектуру и может быть скрыто регрессивной. Эти простые, важные объемы действительно могут быть очень подходящими для общественных зданий для создания сильных «центров», но они не структурируют среду и в них трудно жить. Внутренняя часть, которая сосредоточена на себе и не открывается в мир, грот -подобный «органический» дом, предполагающий «полный» или завершенный интерьер, приближается к фантазму пренатального состояния.Следовательно, есть веские причины использовать прямоугольники quadri , чтобы смотреть на мир, разбирать полы, стены и потолки и отмечать их12. Каждый из них о другом. Небо не далекое, смотрящее в небо не смотрящее на горизонт, далекое не бездна. Имеет смысл структурировать поле зрения спереди, сзади, слева, справа.

Заряды в гидрофобной внутренней части белков

Abstract

Заряды по своей природе несовместимы с гидрофобной средой.Предположительно по этой причине ионизируемые остатки обычно исключаются из гидрофобной внутренней части белков и вместо этого обнаруживаются на поверхности, где они могут взаимодействовать с объемной водой. Как это ни парадоксально, ионизируемые группы, скрытые в гидрофобной внутренней части белков, играют важную роль, особенно в трансдукции биологической энергии. Чтобы изучить необычные свойства внутренних ионизируемых групп, мы измерили p K _a остатков глутаминовой кислоты в 25 внутренних положениях в стабильной форме стафилококковой нуклеазы.Два из 25 остатков Glu титровали нормальным p K _a около 4,5; остальные 23 титровались с повышенными значениями p K _a в диапазоне 5,2–9,4 со средним значением 7,7. Флуоресценция Trp и круговой дихроизм в дальнем УФ-диапазоне были использованы для мониторинга влияния внутренних зарядов на конформацию. Эти данные демонстрируют, что хотя заряды, скрытые в белках, действительно дестабилизируют, заряженные боковые цепи могут быть легко похоронены в гидрофобном ядре стабильных белков без необходимости специализированных структурных адаптаций для их стабилизации и без индукции какой-либо серьезной конформационной реорганизации.Кажущийся диэлектрический эффект, испытываемый внутренними зарядами, значительно выше, чем низкие диэлектрические постоянные гидрофобного вещества, используемые для представления внутренней части белка в моделях электростатического континуума белков. Высокая термодинамическая стабильность, необходимая для белков, чтобы противостоять присутствию скрытых зарядов, предполагает путь эволюции ферментов и подчеркивает необходимость учитывать термодинамическую стабильность в любой стратегии разработки новых или измененных активных центров ферментов в белках.

Перенос иона из воды в менее полярную и поляризуемую среду, такую ​​как гидрофобная внутренняя часть белка, является энергетически невыгодным. Внутренние заряды обычно дестабилизируют свернутые состояния белков, поэтому в первую очередь заряженные группы в значительной степени исключены из гидрофобной внутренней части и вместо этого обнаруживаются на границе раздела белок-вода, где они могут взаимодействовать с объемной водой (1). Как это ни парадоксально, внутренние ионизируемые группы в белках необходимы для передачи биологической энергии.Эти типы ионизируемых групп находятся в активных центрах ферментов (2) и необходимы для переноса и ^— и транспорта H ⁺ в таких белках, как АТФаза (3) и цитохром с оксидаза (4), для ионного гомеостаза (5, 6) и для активируемых светом процессов в таких белках, как бактериородопсин (7, 8). Структурные адаптации, необходимые для белков, чтобы выдерживать внутренние ионизируемые группы, и факторы, стабилизирующие внутренние заряды, изучены плохо. По этой причине наше понимание фундаментальных аспектов функции и эволюции белков все еще ограничено, как и наша способность манипулировать и создавать новые ферменты.

Чтобы систематически исследовать способность глобулярных белков переносить присутствие скрытых зарядов, мы измерили p K _a из 25 внутренних остатков глутаминовой кислоты (Glu), которые были введены с помощью мутагенеза во внутренние гидрофобные положения в стафилококковой нуклеазе ( SNase). Поскольку замена внутренних гидрофобных положений на Glu обычно дестабилизирует, эксперименты проводились с высокостабильной формой SNase, известной как Δ + PHS, которая имеет стабильность 11.8 ккал / моль при 298 К (9). Из существующих кристаллических структур некоторых вариантов SNase с внутренними Glu, Asp и Lys в положениях 66 (9–12), 9 (13) и 38 (14, 15) мы знаем, что ионизируемые боковые цепи созданы путем замещения внутренних гидрофобных аминокислоты с ионизируемыми, действительно, внутренние. Ранее мы также показали, что при pH 7 Glu-замещенные варианты нуклеазы Δ + PHS термодинамически стабильны и их конформация сопоставима с конформацией фонового белка (16). Целью данной серии экспериментов было измерение значений p K _a внутренних ионизируемых групп и изучение влияния внутренних зарядов на конформацию белка. С этой целью мы измерили термодинамическую стабильность Glu-содержащих вариантов в широком диапазоне значений pH и использовали флуоресценцию Trp и спектроскопию КД в дальнем УФ-диапазоне для мониторинга структурных последствий ионизации внутренних остатков Glu.

Результаты и обсуждение

Термодинамическая стабильность.

Кажущиеся значения p K _a 25 внутренних остатков Glu определяли путем анализа зависимости термодинамической стабильности от pH. В частности, это разница в термодинамической стабильности () между эталонным белком Δ + PHS и Glu-замещенными вариантами (рис. 1), который содержит информацию о значениях p K _a внутренних групп (10, 12, 14, 15, 17) (значения каждого из 25 вариантов белков при многих значениях pH представлены в таблице S1, с подгонками, используемыми для извлечения значений p K _a ). Этот метод измерения значений p K _a был полезен, потому что p K _a внутренних остатков Glu имел тенденцию сильно нарушаться. Принцип, лежащий в основе экспериментов, используемых для измерения значений p K _a , показан на рис. 1. Красная и синяя кривые на рис. 1 B (относительно правой оси) соответствуют титрованию H ⁺ . типичный внутренний Glu в развернутом виде (p K _a = 4.5) и нативные формы (p K _a = 7,6) белка соответственно. Эти кривые были смоделированы с использованием значений p K _и , полученных путем анализа данных в зависимости от pH, показанных на фиг. 1 B . Середины красной и синей кривых титрования H ⁺ представляют p K _a ; они также соответствуют областям с изменяющейся кривизной в зависимости от pH (черная линия на рис. 1 B ). Область между этими красной и синей кривыми титрования H ⁺ , показанная зеленой кривой на рис.1 B (относительно левой оси), точно соответствует кривой, измеренной экспериментально с химической денатурацией (черная кривая и квадратные символы на рис. 1 B ).

На рис. 1 показано, как значения внутренних ионизируемых групп p K _a могут быть получены непосредственно путем анализа данных по pH. p K _a значения, измеренные таким образом, являются кажущимися p K _a значениями, поскольку предполагается, что p K _a не зависит от pH, и поскольку анализ предполагает, что одна ионизируемая группа с сильно возмущенный p K _a определяет vs.Кривая pH. Справедливость этого последнего предположения была проверена ранее в одном варианте (9, 10, 14, 15) и путем измерения значений p K _a всех поверхностно-ионизируемых групп в Δ + PHS-нуклеазе (18, 19).

p

Кажущиеся значения p K _a остатков Glu в 23 из 25 внутренних положений (рис.2 A и таблица 1) намного выше, чем нормальные значения p K _a из 4.5 для Glu в воде (19, 20). Сдвиги вверх в p K _a согласуются с тем, что ионизируемые части остатков Glu являются внутренними, по крайней мере, частично удаленными из основной массы воды, и из-за влияния большого количества основных остатков на поверхности белка. Направление сдвигов показывает, что для скрытых остатков Glu нейтральное состояние карбоксильных групп предпочтительнее заряженного. Сдвиги предполагают, что дегидратация скрытых карбоксильных боковых цепей не компенсируется полностью благоприятными взаимодействиями между карбоксилатным фрагментом и внутренними полярными группами или поверхностными зарядами, поляризацией их локального микроокружения или любым другим фактором, который может повлиять на p К _а внутренней группы.

p K _a значения остатков Glu в 25 внутренних положениях в стафилококковой нуклеазе . ( A ) Видимые значения p K _a . Цветовая кодировка предназначена только для направления взгляда: белый цвет идентифицирует группы без измеримого сдвига в p K _a относительно нормального p K _a Glu в воде; зеленый использовался для групп с p K _и между 4,5–6,5; голубой для групп с p K _a между 6.5–8,0; темно-синий для групп с p K _a выше 8.0. Правая ось описывает значения из Таблицы 1. ( B ) Расположение 25 внутренних позиций, закодированных цветом в соответствии с p K _a для Glu в этой позиции, как указано в ( A ).

Кажущиеся значения p K _a значения и энергетические затраты для создания заряда в 25 внутренних позициях в SNase

Значения p K _a значений 23 остатков Glu с нарушенным p K _a варьировался от 5.2–9,4 при среднем значении 7,7. Это одни из самых высоких значений p K _a , когда-либо измеренных для карбоксильных групп в белках. Какими бы большими ни были измеренные сдвиги в p K _a , они намного меньше, чем то, что можно было бы рассчитать стандартными методами континуальной электростатики с диэлектрической проницаемостью белка 2 или 4 (9, 10, 17). Действительно, когда разница между измеренными значениями p K _a и нормальным p K _a равна 4.5 для Glu в воде были проанализированы с помощью простой модели Борна (уравнение 3 в Dwyer et al. (10)), кажущиеся диэлектрические постоянные (), сообщаемые внутренними карбоксильными группами, находились в диапазоне 9–38 (Таблица 1). Эти кажущиеся диэлектрические постоянные не следует путать с диэлектрической проницаемостью белка. Кажущиеся диэлектрические постоянные просто представляют собой значения диэлектрической проницаемости, необходимые для воспроизведения экспериментального p K _a с конкретной моделью (в данном случае уравнение 3 в Dwyer et al (10), которое основано на классической континуальной электростатической теория).Значения в таблице 1 были рассчитаны в приближении, что сдвиги в p K _a регулируются исключительно дегидратацией скрытых заряженных групп и что ионизируемые группы захоронены бесконечно далеко от объемной воды. Они приблизительны и зависят от модели; тем не менее, они довольно устойчивы: значения, полученные с другими моделями континуума диэлектрика, сравнимы со значениями, перечисленными в таблице 1. Значимость значений состоит в том, что они иллюстрируют, что кажущаяся поляризуемость, сообщаемая всеми внутренними остатками Glu, является высокой.Даже самые низкие значения 9,2, о которых сообщает Glu-104, уже представляют собой высокую диэлектрическую проницаемость, сравнимую с диэлектрической проницаемостью сильно поляризуемого материала. Эти результаты согласуются с более ранними экспериментальными исследованиями с SNase, которые показали, что внутренняя часть белка может вести себя как материал с высокой диэлектрической проницаемостью (9, 10, 17). Расчеты, основанные на моделировании МД, также показали, что диэлектрические свойства внутри белка могут быть сопоставимы со значениями, указанными в Таблице 1 (21–23).Совсем недавно Фрид с соавторами указали, что высокие кажущиеся диэлектрические постоянные внутри белков также могут быть результатом игнорирования в расчетах эффектов диэлектрического насыщения для эталонного состояния (то есть модельного Glu в воде) (24). В нашей лаборатории проводится тщательное вычислительное исследование диэлектрических эффектов, которые определяют ионизационные свойства внутренних остатков Glu в SNase.

Структурные и физические факторы, которые определяют значения p K _a внутренних групп, недостаточно изучены.Широкий диапазон значений p K _a , измеренных с 25 внутренними остатками Glu в SNase, предполагает, что эти факторы значительно различаются от места к месту в пределах белка. Не наблюдалось очевидной корреляции между величиной сдвига p K _a и положением ионизируемой группы (рис. 2 B ), а также с различными структурными показателями, такими как расстояние до полярных или заряженных групп. глубина захоронения и т. д. p K _a из Glu-118 и Glu-20 нормальные или ниже нормальных, что неудивительно: Gly-20 находится на поверхностном β-витке; следовательно, Glu-20, вероятно, находится в массе воды.Glu-118 заменяет Asn-118; следовательно, по всей вероятности, его микросреда уже адаптирована для приема полярных групп. В отличие от этих двух случаев, значения p K _a некоторых других остатков Glu сдвинуты почти на пять p K _a единиц; это одни из самых больших сдвигов в значениях p K _a , измеренных экспериментально. Сдвиги в большинстве значений p K _a были достаточно большими, чтобы сделать большинство остатков Glu полностью или, по крайней мере, частично нейтральными при pH 7.Большинство значений p K _и находились в диапазоне, необходимом для естественных внутренних карбоксильных групп для облегчения реакций обмена H ⁺ в физиологических условиях.

Конформационные последствия ионизации внутренних остатков клея.

Чтобы изучить влияние ионизации внутренних остатков Glu на конформацию нативного состояния белка, мы контролировали титрование H ⁺ с флуоресценцией Trp и КД в дальнем УФ-диапазоне при 222 нм в диапазоне pH, в котором внутренние остатки Glu титровать (рис.3 A , B ; термодинамические параметры раскрытия основания приведены в таблице S2). Большинство Glu-содержащих вариантных белков были полностью свернутыми и нативными при значениях pH до 9,5, что соответствует наивысшему измеренному p K _a . Наблюдение за тем, что большинство вариантов переносило ионизацию внутренних остатков Glu без какой-либо обнаруживаемой глобальной конформационной реорганизации, показывает, что заряды могут быть допустимыми в гидрофобной внутренней части белков без необходимости каких-либо специализированных структурных адаптаций для стабилизации заряда. , даже в белке, который не эволюционировал, чтобы использовать внутренние заряды как часть своего функционального цикла.Эта неотъемлемая способность белков противостоять внутренним зарядам согласуется с идеей о том, что относительно гидрофобная и дегидратированная внутренняя часть белков ведет себя как материал с высокой диэлектрической проницаемостью. Физические и структурные основы этого важного свойства свернутых белков не изучены и в настоящее время исследуются в нашей лаборатории. Это свойство может включать стабилизацию внутренних зарядов за счет проникновения воды в гидрофобное ядро ​​(9, 10, 13, 25) или за счет тонкой структурной перестройки ниже уровня обнаружения с помощью оптической спектроскопии (9, 14, 15, 26).Без этого важного свойства белки не могли бы выполнять некоторые из самых фундаментальных процессов преобразования энергии, необходимых для жизненного состояния.

Структурные изменения, связанные с ионизацией внутренних остатков Glu . ( A ) Базовое развертывание вариантов с внутренним Glu, контролируемое флуоресценцией Trp. ( B ) Базовое развертывание вариантов с внутренним Glu отслеживалось с помощью КД в дальнем УФ-диапазоне при 222 нм. Сплошная черная линия (треугольник) идентифицирует базовый профиль разворачивания фонового белка, используемого для создания Glu-содержащих вариантов.Серые линии (сплошной кружок) представляют собой подгонки уравнения 1 или 2 из Карпа и др. (9) для получения средних точек основных и второстепенных структурных переходов, описанных в таблице 1. Синие линии обозначают случаи, когда преденатурационные переходы предполагают частичные структурные изменения, связанные с ионизация внутренней Glu. Красные линии обозначают случай, когда титрование внутренней группы совпадает с переходом основного разворачивания. ( C ) Расположение остатков Glu, которые способствуют частичному развертыванию (синий), глобальному развертыванию (красный) или отсутствие конформационной реорганизации, связанной с ионизацией (серый).

Только один вариант (I92E) из 25, которые были изучены, был развернут глобально за счет ионизации внутренней Glu. Развертывание варианта I92E является следствием как высокой дестабилизации, вызванной заменой Ile-92 на нейтральный Glu, так и большого сдвига вверх его p K _a *. Если бы p K _a Glu-92 можно было измерить в еще более стабильной форме SNase, оно, по всей вероятности, было бы даже выше, чем измеренное значение 9.0. Пять других вариантов (L25E, A58E, V66E, A90E и A132E) показали умеренный, но четкий преденатурационный переход в диапазоне pH, в котором внутренние остатки Glu стали заряженными (фиг. 3 A , B ). Эти pH-зависимые изменения спектроскопических сигналов согласуются с тонкой и относительно незначительной конформационной реорганизацией, связанной с ионизацией внутреннего Glu (9, 26). Подобная структурная реорганизация, связанная с ионизацией внутренних групп, описана и в других белках (27, 28).Некоторые из внутренних остатков Glu в SNase, которые запускают локальное разворачивание или реорганизацию, находятся на концах элементов вторичной структуры, где может происходить изнашивание (Fig. 3 C ). В нашей лаборатории проводится обширное исследование ЯМР-спектроскопии, чтобы изучить, в какой степени высокие кажущиеся диэлектрические постоянные, сообщаемые внутренними остатками Glu, отражают локальную конформационную реорганизацию.

Свободная энергия образования заряда внутри белка.

При pH 7 большинство внутренних карбоксильных групп были полностью или, по крайней мере, частично нейтральными.При этом pH дестабилизация нативного состояния за счет замены внутренних гидрофобных групп на Glu не обязательно является результатом введения заряда в гидрофобную среду. Вместо этого он отражает замену гидрофобной группы нейтральным Glu и сопутствующий сдвиг в p K _a . Фактическая стоимость создания отрицательного заряда на внутренних позициях (в таблице 1) была рассчитана из разницы между кажущимися значениями p K _a в таблице 1 и нормальным p K _a из 4.5 для Glu в воде. Большинство значений находится в диапазоне 3,1–6,7 ккал / моль. Это большие свободные энергии, сравнимые с чистой стабильностью многих мелких глобулярных белков, но они невелики по сравнению со стоимостью переноса иона из воды в строго гидрофобный материал с диэлектрической проницаемостью в диапазоне 2–4, рассчитанной с помощью классический континуальный электростатический метод (9, 10, 14, 15, 17). Актуальность континуальных расчетов гидратации ионов еще предстоит установить путем сравнения с полностью микроскопическим моделированием.Удивительные результаты были получены для гидратации ионов на границах раздела между областями с низкой и высокой диэлектрической проницаемостью, что не может быть объяснено электростатикой континуума (29). Содержательное сравнение экспериментальных значений со свободной энергией гидратации просто пока невозможно. Однако экспериментальных данных без какого-либо дальнейшего анализа достаточно, чтобы предположить, что внутренняя часть белка ведет себя как материал с высокой кажущейся поляризуемостью, что объясняет, почему нуклеаза Δ + PHS была настолько устойчивой к наличию внутренних зарядов.

Подробное структурное и физическое происхождение высокой кажущейся поляризуемости, о которой сообщают эти внутренние остатки Glu, еще предстоит изучить экспериментально. Кажущаяся поляризуемость может отражать вклад всех факторов, которые стабилизируют заряженную форму внутренней Glu (то есть взаимодействия внутреннего заряда с поверхностными зарядами, с диполями, с полем реакции объемной воды, электронной поляризацией, конформационной реорганизацией, проникновением воды, так далее). Наши данные показывают, что диэлектрическая проницаемость свернутых белков достаточно низкая, чтобы предотвратить ненужное захоронение ионизируемых групп, которое дестабилизирует сложенное состояние и, возможно, способствует агрегации, но достаточно высока, чтобы допустить присутствие ионизируемых групп и зарядов во внутренней гидрофобной среде, когда необходимо для работы.Как достигается этот хрупкий баланс, еще предстоит объяснить.

Последствия.

p K _a и значения в Таблице S2 и Таблице S1 будут неоценимы для сравнительного анализа и критической оценки вычислительных методов для расчетов электростатических структур на основе структур. Расчет значений p K _a внутренних ионизируемых групп и электростатической энергии внутри белка по-прежнему представляет собой серьезную проблему. Эти равновесные термодинамические параметры отражают баланс между большими вкладами (например,g., кулоновские эффекты и эффекты гидратации) противоположного знака, каждый из которых трудно точно вычислить. Наши данные будут полезны для калибровки алгоритмов, чтобы улучшить их производительность и их полезность для исследования функциональной электростатики в процессах преобразования энергии в биологических системах.

В ферментах и ​​белках, участвующих в транспорте H ⁺ , настраиваются значения p K _a ионизируемых групп, которые отдают или принимают H ⁺ (например,g., депрессия p K _a для основных групп и повышение для кислых), чтобы облегчить перенос H ⁺ между ними (30). Наши данные показывают, что настройка значений p K _и для функциональных целей не обязательно требует эволюции диполярных клеток или других специализированных структурных микросред. Хотя различные области внутри SNase, по-видимому, по-разному реагируют на присутствие отрицательного заряда, данные на рис. 2 A показывают, что, по крайней мере, в этой высокостабильной форме SNase, просто в силу того, что она является внутренней, p Значения K _a внутренних остатков Glu сдвинуты в диапазон значений p K _a , используемых встречающимися в природе карбоксильными группами для транспорта H ⁺ и других биологических процессов, активируемых H ⁺ .В настоящее время проводятся исследования внутренних основных остатков для определения степени, в которой энергия ионизации внутренних основных групп сопоставима с таковой внутренних кислотных групп.

Таким образом, результаты, полученные с внутренними остатками Glu, предполагают, что эволюция функции в белках, которые зависят от внутренних ионизируемых групп, могла больше определяться эволюцией термодинамической стабильности, необходимой для выдерживания внутренних ионизируемых групп (31, 32), чем путем эволюции специальной динамики или структурных микросред с высокой полярностью или любыми другими свойствами, необходимыми для настройки значений p K _a для функциональных целей.Наши результаты также предлагают стратегию для разработки ферментов de novo или для разработки ферментов с модифицированной функцией, которая использует взаимосвязь между термодинамической стабильностью и способностью белков переносить присутствие внутренних зарядов и внутренних ионизируемых групп со смещенным p . K _a значения. При разработке ферментов de novo внутренняя термодинамическая стабильность фермента, вероятно, будет таким же важным фактором, как и конструкция фактических полярных или заряженных функциональных групп, необходимых для достижения определенного химического состава.

математический режим — Внутренняя часть заданной нотации — Математический режим TeX

Сеть обмена стеков

Сеть Stack Exchange состоит из 176 сообществ вопросов и ответов, включая Stack Overflow, крупнейшее и пользующееся наибольшим доверием онлайн-сообщество, где разработчики могут учиться, делиться своими знаниями и строить свою карьеру.

2. 0
3. +0
6. Авторизоваться Зарегистрироваться

TeX — LaTeX Stack Exchange — это сайт вопросов и ответов для пользователей TeX, LaTeX, ConTeXt и родственных систем набора.Регистрация займет всего минуту.

Кто угодно может задать вопрос

Кто угодно может ответить

Лучшие ответы голосуются и поднимаются наверх

Спросил 5 лет, 1 месяц назад

Просмотрено 21к раз

Я пытаюсь сопоставить это:

Уже пробовал (в амсматике)

  $ A ^ 0 $
$ A ^ o $
$ A ^ \ circ $
  

Однако ни один из них не соответствует изображению выше. {\ mathrm {o}} $ , вы можете определить макрос.{\ mathrm {o}}% } \ begin {document} $ \ interior {A} \ interior {B} $ \ конец {документ}

  \ DeclareFontFamily {U} {mathb} {\ hyphenchar \ font45}
\ DeclareFontShape {U} {mathb} {m} {n} {<-6> matha5 <6-7> matha6 <7-8>
mathb7 <8-9> mathb8 <9-10> mathb9 <10-12> mathb10 <12-> mathb12} {}
\ DeclareSymbolFont {mathb} {U} {mathb} {m} {n}

\ DeclareMathAccent {\ abxring} {0} {mathb} {"38}

\ DeclareFontFamily {U} {mathb} {\ hyphenchar \ font45}
\ DeclareFontShape {U} {mathb} {m} {n} {<-6> matha5 <6-7> matha6 <7-8>
mathb7 <8-9> mathb8 <9-10> mathb9 <10-12> mathb10 <12-> mathb12} {}
\ DeclareSymbolFont {mathb} {U} {mathb} {m} {n}
  

  \ documentclass {article}

\ begin {document}


\ [
А ^ \ mathrm {o}
\ quad
\ Strut ^ \ mathrm {o}
\ quad
A \ mkern-1mu \ vrule width0pt height 1em ^ \ mathrm {o}
\ quad
A \ mkern-1mu {\ vrule width0pt height 2ex} ^ \ mathrm {o}
\]

\ конец {документ}